Synthèse sur lame de verre : Celluspot
Les CelluSpots™ sont des arrays de peptides conjugués à la cellulose sur une surface plane qui est
une lame de verre. Les peptides sont synthétisés sur un support en cellulose modifiée qui peut être
dissout après synthèse. Les solutions de peptides individuels se lient de façon covalente à la cellulose
macro moléculaire et sont ensuite spottés sur la surface choisie. Après évaporation du solvant, une
couche tridimensionnelle s’est formée et ne peut pas être dissoute par les réactifs aqueux utilisés
dans les expériences.
Cette structure 3D contient jusqu’à 1000 plus de peptides sur une surface donnée qu’un dépôt
monocorde conventionnel.
Ceci déplace l’équilibre de liaison dans une direction favorable pour les interactions protéine-protéine
de faible affinité.
Les CelluSpots™ sont un outil commode pour la détection de partenaires d’interaction avec des
séquences d’acides aminés définis qui sont présents sur la surface de la lame.
Des celluspots spécifiques avec des séquences prédéfinies sont disponibles pour étudier les substrats
de kinases.
Avantages :
– De nombreuses copies identiques de la même qualité peuvent être préparées.
– Une plus faible quantité d’échantillon est nécessaire.
– Une forte densité de peptides permet une détection d’intéractions de faible affinité.
– Les propriétés chimiques sont comparables à celles des membranes SPOT.
– Détection par réaction enzymatique colorée, autoradiographie ou sondes fluorescentes.
– Compatible avec les équipements standards de micro-arrays, tels que les chambres d’hybridation et les scanners.
– Faible liaison non spécifique des protéines à la cellulose.
Applications:
– Interactions Protéine-protéine
– Mapping d’épitope
– Interactions Récepteur-ligand
– Activités enzymatiques (ex: kinases)peptide_arrays2
– Liaison d’acides nucléiques
– Etudes de liaisons des métaux
Synthèse sur membrane
La technologie de synthèse SPOT est connue comme une méthode rapide et robuste pour générer
des banques de peptides sur des membranes – particulièrement en cellulose.
Bien que ces banques de peptides sur membranes SPOT soient populaires, elles présentent
quelques différences par rapport aux Celluspots :
La ré-utilisation de ces membranes SPOT est limitée. Pour certaines expériences elles ne peuvent
être utilisées qu’une seule fois.
Référence : Frank, R., Tetrahedron, 1992, 48, 9217–9232
