Le kit EZ DNA Methylation-DIRECT Kit™ est le dernier-né des protocoles de Zymo concernant l'analyse de la méthylation: plus besoin de purifier vos ADN, vous réaliser l'analyse directement sur vos cellules !! La sensibilité de ce kit permet de travailler avec un minimum de 10 cellules ou 50 pg d'ADN !! Le kit permet de réduire la dégradation de la matrice et offre une conversion complète des Cytosines non méthylées. La matrice d'ADN ainsi traitée peut ensuite être utilisée pour une PCR sensible à la méthylation suivie d'une analyse de la méthylation par enzyme de restriction, séquençage, microarrays, etc. Cette réaction peut être effectuée en 3 heures.

Caractéristiques: Matériel de départ: Cellules: Compatible avec des cellules de tissus solides, culture, sang , buffy coat, biopsies, échantillons LCM (Laser-Capture Micro-Dissection) et FFPE, etc. Le nombre de cellules par traitement est de 10 - 105 cellules. Pour des résulats optimaux, le nombre de cellules doit être compris entre 1 x 103 et 8 x 104 cellules. ADNs purifiés: échantillons contenant 50 pg - 2 μg d'ADN  avec des résultats optimaux dans la gamme 200-500 ng. • Efficacité de conversion: > 99.5%  de résidus C non méthylés sont convertis en U; > 99.5% protection des cytosines méthylées. • Quantité finale d'ADN: > 80% • Sensibilité de détection (Limite basse): 10 cellules pour une amplification par PCR.

Protocole: Protocole EZ DNA Methylation DIRECT kit

Composition du kit: Proteinase K lyophilisée et tampon de stockage 5mg M-Digestion Buffer (2X) 4 ml 5 tubes de CT Conversion Reagent 1.5 ml M-Dilution Buffer, M-Solubilization Buffer 4.5 ml M-Reaction Buffer 1 ml 30 ml M-Binding Buffer 6ml M-Wash Buffer 10 ml M-Desulphonation Buffer 1.0 ml M-Elution Buffer 50 colonnes Zymo-Spin IC 50 tubes de collecte